Team:Osaka/Meeting

From 2009.igem.org

(Difference between revisions)
(→2009/08/02)
(→2009/08/02)
Line 45: Line 45:
;;;;;;#分光光度計でOD=0.3になるまでIncubate。
;;;;;;#分光光度計でOD=0.3になるまでIncubate。
;;;;;;#三角フラスコをOn ice 10min (常に道具は冷やした状態をこころがける）
;;;;;;#三角フラスコをOn ice 10min (常に道具は冷やした状態をこころがける）
-
;;;;;;#遠心分離管（J.20、サイズに注意、冷やしておく）に20mlずつ分注。はかりで測って重さを均一にする。
+
;;;;;;#遠心分離管（J.20、サイズに注意、冷やしておく）にピペッターで20mlずつ４本分注。はかりで測って重さを均一にする。
-
;;;;;;#8krpm,3℃、roter ID 20、５min で遠心分離。
+
;;;;;;#8krpm,4℃、roter ID 20、５min で遠心分離。（ローターのサイズにも注意）
;;;;;;#上澄みをデカンテーション。
;;;;;;#上澄みをデカンテーション。
-
;;;;;;#0.1M MgCl2溶液
+
;;;;;;#0.1M MgCl2溶液(これも使う直前に冷やす）をそれぞれ最初にピペッターで15ml加えてVortex,その後同じものをさらに10ml加える。
 +
;;;;;;#On ice 10min冷蔵室に放置
 +
;;;;;;#8krpm,4℃,roterID 20, 5minで遠心分離。
 +
;;;;;;#上澄みをデカンテーション。
 +
;;;;;;#0.1M CaCl2（冷やしておく）をピペッターで25ml加えてvortex、さらに10ml加える。
 +
;;;;;;#on ice 30min冷蔵室に放置。
 +
;;;;;;#8krpm,4℃,roterID 20, 5minで遠心分離。
 +
;;;;;;#上澄みをデカンテーション。（注意深く）
 +
;;;;;;#ピペットマンで750μl 0.1M CaCl2、750μl 50％　グリセロール（すべて冷やされているもの）を加えて

Revision as of 05:40, 3 August 2009

IGEMOSAKALogo.png


References for wiki


Home Team Project Parts & Devices Notebook Links


From Notebook

2009/08/01

2009/08/02

Competent　cellの作り方

  1. あらかじめ菌を培養しておく。
  2. Single colonyを試験管にとり、5mlのLBを加える。
  3. 37度で一晩おく。（over night→o/n)
  4. 大量に菌が得られたら、40ml LBを入れた三角フラスコに菌にいれて37度で約２時間Incubate。
  5. 分光光度計でOD=0.3になるまでIncubate。
  6. 三角フラスコをOn ice 10min (常に道具は冷やした状態をこころがける）
  7. 遠心分離管（J.20、サイズに注意、冷やしておく）にピペッターで20mlずつ４本分注。はかりで測って重さを均一にする。
  8. 8krpm,4℃、roter ID 20、５min で遠心分離。（ローターのサイズにも注意）
  9. 上澄みをデカンテーション。
  10. 0.1M MgCl2溶液(これも使う直前に冷やす）をそれぞれ最初にピペッターで15ml加えてVortex,その後同じものをさらに10ml加える。
  11. On ice 10min冷蔵室に放置
  12. 8krpm,4℃,roterID 20, 5minで遠心分離。
  13. 上澄みをデカンテーション。
  14. 0.1M CaCl2（冷やしておく）をピペッターで25ml加えてvortex、さらに10ml加える。
  15. on ice 30min冷蔵室に放置。
  16. 8krpm,4℃,roterID 20, 5minで遠心分離。
  17. 上澄みをデカンテーション。（注意深く）
  18. ピペットマンで750μl 0.1M CaCl2、750μl 50％　グリセロール（すべて冷やされているもの）を加えて
Retrieved from "http://2009.igem.org/Team:Osaka/Meeting"