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August/11 August 2009
From 2009.igem.org
コロニー数カウント(8/10にトラフォ行ったもの)
No. コロニー数 1-23L 100> 1-15N 10 2-6P 10< 1-6I 10< 1-12H 10 1-18C 10< 1-20F × 液培(5mL)にAmp 5uL , Kan 25uL入れて植菌
制限酵素処理
Vector 1-2M 12 SpeⅠ 1 PstⅠ 1 No.2 Buffer 2 dH2O 4 total 20uL Insert 2-8M 5 XbaⅠ 1 PstⅠ 1 No.2 2 dH2O 11 total 20 uL Vector 1-23L 12 EcoRⅠ 1 XbaⅠ 1 No.2 2 dH2O 4 total 20uL Insert 3-18O 5 EcoⅠ 1 SpeⅠ 1 No.2 2 dH2O 11 total 20uL 2時間ほど37℃で反応させた
電気泳動
ゲル切り出し
精製を経て
ライゲーション
それぞれ DNA溶液 44 10* buffer 5 ライゲース 1 total 50uL
トランスフォーメーション
各2uL , 1-14F は 4uL
1-14H kan
1-14F kan
2-18F Amp ('8/10コンピ
1-23J Amp
1-12C Amp (スーパーコンピ
KanのものはLB培地を加えた後、小さな試験管に入れて振とう培養(1~2hr)してからプレートにまいた
