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Team:Chiba/Project/characterization
From 2009.igem.org
実験の具体的操作
まず、LuxR Mutantsとpositive controlとしてLuxR WT, negative control としてレポーターが含まれない菌をそれぞれグリストからつつき、12h@37℃液体培養。
・pC1A3-LuxR Mutants / pLux-GFP @JW1262 : Sample No.1~11, L1, L2
・pC1A3-LuxR WT / pLux-GFP @JW1262 : Positive control
・GFP等のレポーターが入っていない菌 : Negative control
- Negative controlとして, gfpなしは不適切ではないでしょうか。--Masahiro 18:58, 20 October 2009 (UTC)
- ていう指摘がこのまえのミーティングででましたね，luxRwtがcontrolになってるので，gfpは除いてokです。--Maiko 23:47, 20 October 2009 (UTC)
次にCultureを48ピンでNCフィルタへ植菌し、フィルタを固体培地にのせて12h@37℃で培養。
最後にAHLの濃度を0, 1, 10, 100, 1000 nMで（一番最初の9月22日の実験は0, 10, 1000 nMでおこないました。）ふった固体培地に、NCフィルタを移動。
この時を測定開始点とし、30分毎に4時間蛍光の上がり方を目視で確認。
