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ULB/11 August 2009
From 2009.igem.org
Début de construction (ligation) en Standard 10
1er construction : le promoteur (BBa_R0011) et le RBS (BBa_B0034) le plasmide de destination doit contenir la brick ccdB (BBa_P1010) (induit la mort de la cellule) et un gène de résistance différent de celui des plasmides contenant le promoteur et le RBS. Comme nos plasmides sont résistants à l’ampicilline, on choisit le plasmide de destination pSB1C3 avec la brick BBa_P1010 celui-ci résistant au chloramphénicol.
Laboratory manipulation
- Thermoporation de BBa_I51020 (plasmide de destination résistant à l’ampicilline) avec des bactéries thermocompétentes.
- Digestion de BBa_I51020 avec les enzymes EcoRI et PstI
Computer part
- Commande des primers pour amplification de ccdA +son promoteur faible constitutif (mob promoteur, non issu d’E. coli)
- Création de BioBricks (ccdA dans le sens reverse et forward)
