ULB/13 August 2009

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==Manipulation on plasmides==
==Manipulation on plasmides==
*Bacteria with the plasmid with RBS (BBa_B0034) growed.  
*Bacteria with the plasmid with RBS (BBa_B0034) growed.  
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*La ligation du promoteur-RBS-Plasmide (résistant au chloramphénicol) n’a pas fonctionné : la raison pourrait être protocole l’utilisation  du manuel d’assemblage, qui nous disait de laisser liguer 10 minutes à température ambiante, puis de désactiver les enzymes alors que la notice de la T4 ligase, conseil de la laisser 24h.
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*The ligation of the promoter-RBS-plasmid (chloramphenicol resistant) didn't work: the reason could be the use of the protocol of manual assembly, who told us to leave league 10 minutes at room temperature, then deactivate the enzymes, insted of 24 hours by the T4 ligase guide.  
*Vérification que les bricks sont présent dans le milieu dans nos extractions : Digestion du promoteur, promoteur+RBS, RBS+RFP et le terminateur par les enzymes de restrictions EcoRI et Spel pour les 2 premiers et Xbal et Pstl pour les autres.
*Vérification que les bricks sont présent dans le milieu dans nos extractions : Digestion du promoteur, promoteur+RBS, RBS+RFP et le terminateur par les enzymes de restrictions EcoRI et Spel pour les 2 premiers et Xbal et Pstl pour les autres.
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*Nous avons fait une PCR avec les amorces reçues pour ccdA programme à 55°C puis migration sur gel
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*Verify that the bricks are now in the medium of our extractions: Digestion of the promoter and promoter + RBS by restriction enzymes EcoRI and Spel, RBS + RFP and the terminator by XbaI and PstI.
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*We made a PCR with primers for ccdA program received at 55 ° C then a gel migration.
==Results==
==Results==

Revision as of 16:15, 20 September 2009

August 13, 2009

Manipulation on plasmides

  • Bacteria with the plasmid with RBS (BBa_B0034) growed.
  • The ligation of the promoter-RBS-plasmid (chloramphenicol resistant) didn't work: the reason could be the use of the protocol of manual assembly, who told us to leave league 10 minutes at room temperature, then deactivate the enzymes, insted of 24 hours by the T4 ligase guide.
  • Vérification que les bricks sont présent dans le milieu dans nos extractions : Digestion du promoteur, promoteur+RBS, RBS+RFP et le terminateur par les enzymes de restrictions EcoRI et Spel pour les 2 premiers et Xbal et Pstl pour les autres.
  • Verify that the bricks are now in the medium of our extractions: Digestion of the promoter and promoter + RBS by restriction enzymes EcoRI and Spel, RBS + RFP and the terminator by XbaI and PstI.
  • We made a PCR with primers for ccdA program received at 55 ° C then a gel migration.

Results

les puits du dessus  : Promoteur1, promoteur2, RBS+RFP1, RBS+RFP2, promoteur+RBS1, promoteur+RBS2, terminateur1, terminateur2.les puits du dessus : les résultats des migations des PCR


  • Vérification des bricks:4 Adn amorces « normales », blanc amorces « normales », 4 ADN amorces inverses, blanc amorces inverses.
  • PCR: tous les tubes ont réussi sauf que le tube du blanc n’est pas à sa place (4eme position à la place de 6eme).