ULB/13 August 2009

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August 13, 2009

Manipulation on plasmides

  • Bacteria with the plasmid with RBS (BBa_B0034) growed.
  • La ligation du promoteur-RBS-Plasmide (résistant au chloramphénicol) n’a pas fonctionné : la raison pourrait être protocole l’utilisation du manuel d’assemblage, qui nous disait de laisser liguer 10 minutes à température ambiante, puis de désactiver les enzymes alors que la notice de la T4 ligase, conseil de la laisser 24h.
  • Vérification que les bricks sont présent dans le milieu dans nos extractions : Digestion du promoteur, promoteur+RBS, RBS+RFP et le terminateur par les enzymes de restrictions EcoRI et Spel pour les 2 premiers et Xbal et Pstl pour les autres.
  • Nous avons fait une PCR avec les amorces reçues pour ccdA programme à 55°C puis migration sur gel

Results

les puits du dessus  : Promoteur1, promoteur2, RBS+RFP1, RBS+RFP2, promoteur+RBS1, promoteur+RBS2, terminateur1, terminateur2.les puits du dessus : les résultats des migations des PCR


  • Vérification des bricks:4 Adn amorces « normales », blanc amorces « normales », 4 ADN amorces inverses, blanc amorces inverses.
  • PCR: tous les tubes ont réussi sauf que le tube du blanc n’est pas à sa place (4eme position à la place de 6eme).