ULB/13 August 2009

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Revision as of 14:13, 13 September 2009

Les bactéries qui ont reçu le plasmide avec RBS (BBa_B0034) ont bien poussé.
La ligation du promoteur-RBS-Plasmide (résistant au chloramphénicol) n’a pas fonctionné : la raison pourrait être protocole l’utilisation du manuel d’assemblage, qui nous disait de laisser liguer 10 minutes à température ambiante, puis de désactiver les enzymes alors que la notice de la T4 ligase, conseil de la laisser 24h.
Vérification que les bricks sont présent dans le milieu dans nos extractions : Digestion du promoteur, promoteur+RBS, RBS+RFP et le terminateur par les enzymes de restrictions EcoRI et Spel pour les 2 premiers et Xbal et Pstl pour les autres.
Nous avons fait une PCR avec les amorces reçues pour ccdA programme à 55°C puis migration sur gel

Vérification des bricks:4 Adn amorces « normales », blanc amorces « normales », 4 ADN amorces inverses, blanc amorces inverses.

PCR: tous les tubes ont réussi sauf que le tube du blanc n’est pas à sa place (4eme position à la place de 6eme).

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-	*[[Vérification des bricks]]:4 Adn amorces « normales », blanc amorces « normales » ~~(problème ???)~~, 4 ADN amorces inverses, blanc amorces inverses.	+	*[[Vérification des bricks]]:4 Adn amorces « normales », blanc amorces « normales », 4 ADN amorces inverses, blanc amorces inverses.

	*[[PCR]]: tous les tubes ont réussi sauf que le tube du blanc n’est pas à sa place (4eme position à la place de 6eme).		*[[PCR]]: tous les tubes ont réussi sauf que le tube du blanc n’est pas à sa place (4eme position à la place de 6eme).