Team:SupBiotech-Paris/Matériel & Méthode

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=== Matériel : ===
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Matériel de détection pour électrophorèse en gel d’agarose
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=== Procédure : ===
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1. Préparation du gel d’agarose :
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a) Pour les bio-briques :
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Préparer un gel d’agarose à 2% (1,5 gramme d’agarose dans 100mL d’H2O bidistillée + 15µL de BET).
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b) Pour isoler l’ADN du phage lambda :
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Préparer un gel d’agarose à 0,7% (0,4 gramme d’agarose dans 100mL d’H2O bidistillée + 15µL de BET).
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2. Mettre l’agarose à chauffer aux micro-ondes 5 à 10 minutes.
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3. Préparer la plaque d’électrophorèse.
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Faire bien attention à l’étanchéité de la plaque.
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4. Ajouter le tampon TAE 1X jusqu’à recouvrir le gel d’agarose.
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5. Préparer les échantillons.
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Mélanger 5µL de tampon de charge pour 15µL d’échantillon d’ADN.
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Préparer le marqueur de taille moléculaire si besoin :
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High range : 0,5µL d’ADN  + 1µL Tampon de charge du marqueur + 4,5µL d’H2O bi distillée.
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6. Vortexer puis centrifuger 2 secondes.
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7. Déposer délicatement les échantillons et le marqueur de masse moléculaire.
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Ne pas utiliser les puits situé sur les coté du gel.
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Déposer le marqueur de masse moléculaire au centre du gel pour faciliter l’analyse de la taille des échantillons.
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Une plaque 8 puits a une contenance d’environ 45µL d’échantillon.
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Une plaque 15 puits peut contenir 15µL d’échantillon.
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7. Placer les électrodes de la cuve d’électrophorèse en sorte que l’ADN migre de l’anode vers la cathode.
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8. Déclencher la migration du gel de 85 volts à 130 volts pendant 45 à 80 minutes.
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Vérifier qu’il y a bien apparition de bulles due au courant électrique et que l’ADN migre dans le bon sens.

Revision as of 12:02, 29 September 2009

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Electrophorèse

Matériel :

Template d’ADN Tampon de charge Marqueur de taille moléculaire Tampon TAE 1X Bromure d’éthidium (BET) Agarose Matériel de détection pour électrophorèse en gel d’agarose

Procédure :

1. Préparation du gel d’agarose : a) Pour les bio-briques : Préparer un gel d’agarose à 2% (1,5 gramme d’agarose dans 100mL d’H2O bidistillée + 15µL de BET). b) Pour isoler l’ADN du phage lambda : Préparer un gel d’agarose à 0,7% (0,4 gramme d’agarose dans 100mL d’H2O bidistillée + 15µL de BET). 2. Mettre l’agarose à chauffer aux micro-ondes 5 à 10 minutes. 3. Préparer la plaque d’électrophorèse. Faire bien attention à l’étanchéité de la plaque. 4. Ajouter le tampon TAE 1X jusqu’à recouvrir le gel d’agarose. 5. Préparer les échantillons. Mélanger 5µL de tampon de charge pour 15µL d’échantillon d’ADN. Préparer le marqueur de taille moléculaire si besoin : High range : 0,5µL d’ADN + 1µL Tampon de charge du marqueur + 4,5µL d’H2O bi distillée. 6. Vortexer puis centrifuger 2 secondes. 7. Déposer délicatement les échantillons et le marqueur de masse moléculaire. Ne pas utiliser les puits situé sur les coté du gel. Déposer le marqueur de masse moléculaire au centre du gel pour faciliter l’analyse de la taille des échantillons. Une plaque 8 puits a une contenance d’environ 45µL d’échantillon. Une plaque 15 puits peut contenir 15µL d’échantillon. 7. Placer les électrodes de la cuve d’électrophorèse en sorte que l’ADN migre de l’anode vers la cathode. 8. Déclencher la migration du gel de 85 volts à 130 volts pendant 45 à 80 minutes. Vérifier qu’il y a bien apparition de bulles due au courant électrique et que l’ADN migre dans le bon sens.

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