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Team:Warsaw/Calendar-Main/11 May 2009
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| - | <li><p>PCR mixture's composition:</P> 2, | + | <li><p>PCR mixture's composition:</P> |
| + | <pre>2,5μl pfu buffer (Fermentas) | ||
| + | 2,5μl MgSO4 (Fermentas) | ||
| + | 1,5μl primers | ||
| + | 1μl dNTPs (10 mM) | ||
| + | 1μl template | ||
| + | 0,5μl pfu turbo polymerase (KNGiE)</pre> | ||
| + | <p>The solution was topped up with H2O to 25μl.</p> | ||
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<li>PCR programs:</li> | <li>PCR programs:</li> | ||
| - | <p>pho</p><pre align="left"> 2min30s | + | <p>pho</p><pre align="left"> 2min30s 95°C <br/> (30s 95°C, 35s 56°C, 3min30s 72°C)x3 <br/> (30s 95°C, 35s 61°C, 3min30s 72°C)x28 <br/> 10min 72°C <br/> ~ 7°C<br/></pre> |
| - | <p>mgtc</p><pre align="left"> 1min30s | + | <p>mgtc</p><pre align="left"> 1min30s 95°C <br/> (30s 95°C, 35s 48°C, 1min 72°C)x3 <br/> (30s 95°C, 35s 58°C, 1min 72°C)x28 <br/> 10min 72°C <br/> ~ 7°C<br/></pre> |
| - | <p>inv</p><pre align="left"> 4min | + | <p>inv</p><pre align="left"> 4min 95°C <br/> (30s 95°C, 1min 53°C , 4min15s 72°C)x31 <br/> 10min 72°C <br/> ~ 7°C |
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Latest revision as of 17:39, 17 September 2009
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PCR pho, mgtc, inv
Kama
Tasks:
- Amplification of pho, mgtc and inv
Methods:
PCR mixture's composition:
2,5μl pfu buffer (Fermentas) 2,5μl MgSO4 (Fermentas) 1,5μl primers 1μl dNTPs (10 mM) 1μl template 0,5μl pfu turbo polymerase (KNGiE)
The solution was topped up with H2O to 25μl.
- PCR programs:
pho
2min30s 95°C
(30s 95°C, 35s 56°C, 3min30s 72°C)x3
(30s 95°C, 35s 61°C, 3min30s 72°C)x28
10min 72°C
~ 7°C
mgtc
1min30s 95°C
(30s 95°C, 35s 48°C, 1min 72°C)x3
(30s 95°C, 35s 58°C, 1min 72°C)x28
10min 72°C
~ 7°C
inv
4min 95°C
(30s 95°C, 1min 53°C , 4min15s 72°C)x31
10min 72°C
~ 7°C
- Electrophoretic separation on 1% agarose gel
- Gel (from left)
- 1. GeneRuler DNA Ladder Mix #SM0333 (Fermentas)
- 2. pho
- 3. pho control -
- 4. mgtc
- 5. mgtc control -
- 6. inv
- 7. inv control -
- No product. Check the template (Salmonella), polymerase (KNGiE) and dNTPs.
Results:
Notes:
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