Team:SupBiotech-Paris/BiobricksFr

Cette BioBrick peut être utilisée pour contrôler un mécanisme de rétrocontrôle qui induit le cycle lytique du phage Lambda (Link plasmide Wiki).
Dans E.coli, pLac fait partie de l’opéron lactose. LacI est constamment exprimé et réprime pLac. En présence de Lactose, LacI est inhibé et pLac est actif et permet la transcription de beta-galactosidase. Le Lactose peut être substitué par IPTG (Isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside).
Cette BioBrick contient déjà un fort RBS pour induire directement la transcription d’un gène.

La cassette peut être utilisée pour créer un vecteur recombinant par insertion d’un gène dans un bactériophage non lytique comme le phage Lambda.
En fait, il permet de savoir si le bactériophage est modifié ou non et si l’insert est exprimé ou non. Lorsque le virus est modifié, la cassette kanamycine induit une résistance à la kanamycine, donc la bactérie devient résistante. Lorsqu’elles ne sont pas modifiées les bactéries sont tuées par la kanamycine.
Cette BioBrick est complétée par B0014 + P1003 + B0014 pour finir la transcription avant la cassette de résistance.

En fait il permet de savoir si un bactériophage est modifié ou non et si l’insert est exprimé ou non. Lorsque le virus est modifié, la cassette de kanamycine induit une résistance à la kanamycine, donc la bactérie devient résistante et lorsque le virus n’est pas modifié, les bactéries sont tuées par la kanamycine.
Cette BioBrick peut être utilisée comme un reporter ou comme une simple cassette de résistance.
Le double terminateur permet l’arrêt de la translation d’ARN avant la cassette de résistance, donc c’est déjà créé pour insérer un gène codant avec son RBS avant la cassette de résistance.

Histoire:
Dans E.coli, pLac fait partie de l’opéron lactose. LacI est constamment exprimé et réprime pLac. En présence de Lactose, LacI est inhibé et pLac est actif et permet la transcription de beta-galactosidase. Le lactose peut être substitué par IPTG (Isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside).

LacI (BBa_K292006) contient déjà un fort RBS et un double terminateur, donc cette BioBrick est prête à l’emploi! Histoire: Dans E.coli, pLac fait partie de l’opéron lactose. LacI est constamment exprimé et réprime pLac. En présence de Lactose, LacI est inhibé et pLac est actif et permet la transcription de beta-galactosidase. Le lactose peut être substitué par IPTG (Isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside).

Cette BioBrick contient déjà un terminateur, donc elle prête à l’emploi.

Les plasmides atteignent rarement le noyau s’ils n’ont pas de mécanisme d’incorporation nucléaire. Des études ont été menées sur l’utilisation de séquences pour l’importation nucléaire de séquences génétiques : les séquences DTS (DNA Nuclear Targeting Sequence). Cette BioBrick est capable de jouer ce rôle. Cette séquence, connue pour avoir la capacité de fixer 10 facteurs de transcription différents, assure le transport de l’ADN jusqu’au noyau. Ajoutée au plasmide thérapeutique, cette séquence permet l’entrée et l’expression du plasmide thérapeutique dans le noyau de la cellule cible.

La protéine D est organisée en trimère. Chaque monomère est distant de 5,1nm. La structure cristallographique de la protéine D, comme toute forme trimérique, montre que les extrémités Nter et Cter, sont exposées à la surface de la capside, et sont très proches les unes des autres. Les extrémités Nter et Cter, sont exposées à la surface de la capside mature ce qui donne le choix pour la localisation de la protéine de fusion (Nter ou Cter). Cependant, plusieurs études ont montrées la protéine de fusion en Cter donne de meilleurs résultats.
Donc la protéine D peut être utilisée pour créer une protéine de fusion. La protéine d’internalisation, appelée polypeptide III, est issue d’une base de penton d’adénovirus. Elle peut être utilisée pour créer un phage Lambda recombinant capable d’infecter des cellules eucaryotes. Cette séquence vient du génome ADN du phage Lambda. Il a été amplifié par PCR et introduite dans un plasmide qui vient de la registry. Nous avons quelques problèmes pour trouver les meilleures températures d’hybridation des amorces. Et nous avons procédé à de nombreux essais pour l’introduire dans un plasmide.