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| - | == Electrophorèse ==
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| - | === Matériel : ===
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| - | Template d’ADN
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| - | Tampon de charge
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| - | Marqueur de taille moléculaire
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| - | Tampon TAE 1X
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| - | Bromure d’éthidium (BET)
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| - | Agarose
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| - | Matériel de détection pour électrophorèse en gel d’agarose
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| - | === Procédure : ===
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| - | 1. Préparation du gel d’agarose :
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| - | a) Pour les bio-briques :
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| - | Préparer un gel d’agarose à 2% (1,5 gramme d’agarose dans 100mL d’H2O bidistillée + 15µL de BET).
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| - | b) Pour isoler l’ADN du phage lambda :
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| - | Préparer un gel d’agarose à 0,7% (0,4 gramme d’agarose dans 100mL d’H2O bidistillée + 15µL de BET).
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| - | 2. Mettre l’agarose à chauffer aux micro-ondes 5 à 10 minutes.
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| - | 3. Préparer la plaque d’électrophorèse.
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| - | Faire bien attention à l’étanchéité de la plaque.
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| - | 4. Ajouter le tampon TAE 1X jusqu’à recouvrir le gel d’agarose.
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| - | 5. Préparer les échantillons.
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| - | Mélanger 5µL de tampon de charge pour 15µL d’échantillon d’ADN.
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| - | Préparer le marqueur de taille moléculaire si besoin :
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| - | High range : 0,5µL d’ADN + 1µL Tampon de charge du marqueur + 4,5µL d’H2O bi distillée.
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| - | 6. Vortexer puis centrifuger 2 secondes.
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| - | 7. Déposer délicatement les échantillons et le marqueur de masse moléculaire.
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| - | Ne pas utiliser les puits situé sur les coté du gel.
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| - | Déposer le marqueur de masse moléculaire au centre du gel pour faciliter l’analyse de la taille des échantillons.
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| - | Une plaque 8 puits a une contenance d’environ 45µL d’échantillon.
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| - | Une plaque 15 puits peut contenir 15µL d’échantillon.
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| - | 7. Placer les électrodes de la cuve d’électrophorèse en sorte que l’ADN migre de l’anode vers la cathode.
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| - | 8. Déclencher la migration du gel de 85 volts à 130 volts pendant 45 à 80 minutes.
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| - | Vérifier qu’il y a bien apparition de bulles due au courant électrique et que l’ADN migre dans le bon sens.
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