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Overall project: Message in a bubble

blabla

Constructions

Il faudra faire appaître bien en évidence dans le wiki, au niveau des menus principaux, un lien vers une page qui présente toutes les constructions biuobricks réalisées et envoyées au régistry. Important pour les juges qui vont chercher les réalisations.

A. Plasmid construction

Avant de parler des plasmides que vous avez voulu construire, il faut parler du système entier lui même. Et c'est bien ce que vous faites dans la suite en partie. L'implémentation sur des plasmides particuliers est un point technique qui vient après.

En premier lieu faites un schéma, un diagramme du projet complet: production des proteines signal, système d'adressage de ces protéines vers la membraexterne, production des proteins pour l'émission de vésicules,production des vésicules, réception des vésicules, déclenchement d'un accusé de réception etc...

Un tel schéma peut être dynamique hyperliens vers les parties correspondantes. Ayez en vue le discours modulaire à différentes échelles des biobricks: niveau système, niveau device, niveau ADN... on ne parle des plasmides qu'au niveau inférieur.

The plasmid construction is divided into 2 functional modules :

• The emission system, which aims at producing vesicules.
• The reception system of the signal sent via the vesicules.

A.1. The emission system

To implement our vesicles emission project, we had to take several constrains into account. To put into place all the functionalities we needed, we designed 2 different plasmids as shown on the image below.

Writing the message: production of signaling proteins
First of all, before sending vesicles into the surrounding medium, we have to make sure that every molecule and protein that has to be inside the vesicles is already into place before the bacteria starts the creation of vesicles. In other words, the "emitting" bacteria must produce the proteins of interest, the export systems, the FecA proteins as well as the fusion mechanism before creating vesicles.

To create this delay between the creation of proteins and the production of vesicles, we designed a regulatory cascade consisting of the LacI and TetR repressors. The LacI biobrick is placed in the first plasmid, downstream the pBad promoter and once synthesized acts as a repressor on the pLac promoter. The pLac promoter in the second plasmid then stops expressing TetR. The ptet promoter is then no longer repressed and the creation of non functional TolR can start leading to the emission of vesicles.

Preparing the messenger: creation of the vesicles
Message in a bottle... pour exploiter l'analogie et être très cvlairs on peut continuer tout au long du wiki à parles de proteines message pour les proteines exportes, de bootle (ou bien de enveloppe ou bien de messager) pour les vésicules, etc...

As the creation of vesicles via the over-expression of TolR disturbs the membrane integrity and can create an important cell lysis, it appeared very important to find a way to avoid a long lasting expression of our TolR biobrick once the input signal is on (presence of arabinose in the medium).

To solve this problem, we decided to place a tag on the LacI protein to speed up its degradation. As a consequence, once the arabinose in the medium is depleted, LacI production stops and the remaining LacI is rapidly degraded. The production of TetR can resume and inhibit vesicle production.

• In presence of Arabinose, proteins of interest are created as well as vesicles :

• In the absence of arabinose, the pBad promoter is repressed and there is no production of proteins nor vesicles :

A more accurate description of the parts used at each step of the creation process (including links to the parts registry and references) can be found in the different subdivision of the project.

A.2. The reception system

A FAIRE RAPIDEMENT

B. Modeling overview

Cette image est pas mal. Et c'est quelque chose dans cet esprit qui devrait être tout au début pour présenter le système global de votre projet. Ce n'est pas seulement une image de modélisation.

Mais ce diagramme est à clarifier. Protein exported -> Exported "message" protein production Export system -> (il s'agit bien de l'addessage des protéines ci-dessus vers la membrane externe?) Addressing system of the message protein to the "bottle", sending the message to the bottle TolRIII -> Production of the message bootle (or of the envelope)

On ne comprend pas Chaperone Action. Ce diagramme doit être lisible pour comprendre les mécanismes, sans détails des molécules sous-jacentes. Il peut-être complété par un niveau plus détaillé, faisant apparaître la couche sous-jacente (les protéines particulières impliquées, les construction de plasmides, etc...)

Le même diagramme aussi pour la réception des signaux.