Team:Paris/Production overview strategy

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Overview

B. Our strategy

Note de Stoff (je sais je suis chiant mais c'est qu'un début) : Il faut développer le choix de Tol/pal :

  • faire l'inventaire des publications qui disent que ca existe et que c'est bien foutu et 'connu', liste des équipes qui ont travailler dessus (prévious iGEM).
  • faire l'inventaire des (de là) publication(s) qui a/ont prouvé que ca marche (ou pas :d). (proposition d'aide (liens vers nos amis).
  • en conclure que connaissant les autres system celui là allait bien dans notre choix car : connu, facilement faisable dans le temps qui nous était imparti, obiwan kenobi toussa toussa

On rentre dans les détails de notre stratégie :

  • On a temps de temps disponible devant nous pour une équipe de X personnes 'dédiées' a cette partie (liste des coco qui s'en occupent ... permet de personnalisé un peu et de rendre plus vivant).
  • On découpe dans les étapes AVEC les étapes de vérifications et constructions de celles-ci depuis le début le tout en un listing un peu détaillé avec le plus de liens possible genre ex :
    • on sait qu'il existe des BB, on les vérifies
    • on demande a nos pote de nous filler leur constrctions (ou pas)
    • on entame la verification de ca : renvois vers la construction bidule
    • ok, on passe à la suivante etc etc..


The first strategy is the knock out of tol/pal gene witch destabilize the membrane.It's an active system, whereas the use of conditional mutant is a passive system. A previous study[2] focused on the development of a gene expression system able to induce production of large amounts of OMVs.


To achieve our goal, we decided to take advantage of the second domain of TolR (TolRII). We don’t use the third domain of TolA because, it doesn’t work so good and TolAIII have lot of PstI domain in his sequence. In order to achieve our project, we will over express specifically designed biobricks containing TolRII fused with OmpA signal which allows it to migrate in the periplasm[3].


In the same framework, we could also over express various Tol ligand (like colicin) to destabilize the membrane.


References

  1. ^The Tol-Pal proteins of the Escherichia coli cell envelope an energized system required for outer membrane integrity. Lloubès & Journet 2001 - [http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/11501670 11501670]
  2. ^Improved methods for producing outer membrane vesicles in gram-negative bacteria. Henry & Lloubès 2004 - [http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/15249060 15249060]

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