Team:Paris/Production testing

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Contents

WetLab - Production

  1. The delay
    1. Part I : Testing delay phase I
    2. Part I : Functional testing of the part I
    3. Part II : Testing delay phase II
    4. Part II : Functional testing of the part II
  2. The destabilization of the membrane

The delay

We separate the construction on two plasmids : Part I and Part II.

Part I : Testing delay phase I

plasmid = PSB3T5



Time required : A lOT !!!!!

Experiments ran :


column 1 column 2 column 3 column 4


PCR :

TatABCE matrix :

PCR : PCR : PCR :
Verification on gel :

ok

Verification on gel :

-

Verification on gel :

-

Verification on gel :

-

Purification on gel :

ok

Purification on gel :

-

Purification on gel :

-

Purification on gel :

-


digestion:

TatABCE

digestion: digestion: digestion:
verification digestion:

ok

verification digestion:

-

verification digestion:

-

verification digestion:

-


ligation:

TatABCE

ligation: ligation: ligation:
PCR colo :

ok

PCR colo :

-

PCR colo :

-

PCR colo :

-

miniprep:

STOPPED

miniprep:

-

miniprep:

-

miniprep:

-

sequencing :

-

sequencing :

-

sequencing :

-

sequencing :

-

stock glycerol:


stock glycerol

Cly A(Cter)-(Nter)RFP: S72(clone 8)

stock glycerol

-

stock glycerol

-

Part I : Functional testing of the part I

PBAD LacI LVA- YFP was transforme into Top ten Bacteria and grew on medium :


1% arabinose

1% glucose

LB pure


Part II : Testing delay phase II

plasmid =


Time required : A lOT !!!!!

Experiments ran :

column 1 column 2 column 3 column 4


PCR :

TatABCE matrix :

PCR : PCR : PCR :
Verification on gel :

ok

Verification on gel :

-

Verification on gel :

-

Verification on gel :

-

Purification on gel :

ok

Purification on gel :

-

Purification on gel :

-

Purification on gel :

-


digestion:

TatABCE

digestion: digestion: digestion:
verification digestion:

ok

verification digestion:

-

verification digestion:

-

verification digestion:

-


ligation:

TatABCE

ligation: ligation: ligation:
PCR colo :

ok

PCR colo :

-

PCR colo :

-

PCR colo :

-

miniprep:

STOPPED

miniprep:

-

miniprep:

-

miniprep:

-

sequencing :

-

sequencing :

-

sequencing :

-

sequencing :

-

stock glycerol:

-

stock glycerol

-

stock glycerol

-

stock glycerol

-

Part II : Functional testing of the part II

Ptet RFP Plac TetR was tranforme into Top10 bacteria and grew on media :


0,1% IPTG .

1% glucose.

LB pure.



The destabilization of the membrane

plasmid = PSB3T5






Time required : A lOT !!!!!


Experiments ran :

column 1 column 2 column 3 column 4


PCR :

TatABCE matrix :

PCR : PCR : PCR :
Verification on gel :

ok

Verification on gel :

-

Verification on gel :

-

Verification on gel :

-

Purification on gel :

ok

Purification on gel :

-

Purification on gel :

-

Purification on gel :

-


digestion:

TatABCE

digestion: digestion: digestion:
verification digestion:

ok

verification digestion:

-

verification digestion:

-

verification digestion:

-


ligation:

TatABCE

ligation: ligation: ligation:
PCR colo :

ok

PCR colo :

-

PCR colo :

-

PCR colo :

-

miniprep:

STOPPED

miniprep:

-

miniprep:

-

miniprep:

-

sequencing :

-

sequencing :

-

sequencing :

-

sequencing :

-



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