Team:Paris/Addressing testing

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(Difference between revisions)
(→Adressing system)
(→Adressing system)
Line 123: Line 123:
|'''ligation:'''  
|'''ligation:'''  
-
PBAD  vector : ? E/S  ClyA Cter-RFP Nter vector PSB1A3E/X
+
PBAD  vector : ? E/S  ClyA Cter-RFP Nter vector PSB1A3E/X (x2)
 +
PBAD  vector : ? S/P  ClyA Cter-RFP Nter X/P (x2)
|'''ligation:'''  
|'''ligation:'''  
Line 185: Line 186:
|}
|}
-
 
-
From plate: mRFP
 
-
 
-
 
-
PCR :
 
-
 
-
 
-
 
-
 
-
Verification on gel
 
-
 
-
ok
 
-
 
-
Purification on gel
 
-
 
-
ok
 
-
 
-
digestion:
 
-
 
-
 
-
verification digestion:
 
-
 
-
 
-
ligation:
 
-
 
-
 
-
 
-
PCR colo :
 
-
 
-
miniprep:
 
-
 
-
verifivation of the miniprep by digestion
 
-
 
-
sequencing
 
-
[['''ClyA''']]
 
-
 
-
-ClyA Nterm= biobrick+sequencage+stock glycerol Done
 
-
 
-
-ClyA Cterm= biobrick+sequencage+stock glycerol Done
 
-
 
-
[['''-RFP-''']]
 
-
 
-
-RFP Nterm= biobrick+sequencage+stock glycerol Done
 
-
 
-
-RFP Cterm= biobrick+sequencage+stock glycerol Done
 
-
 
-
[['''-ClyA Cter-RFP Nter-''']]
 
-
 
-
-ClyA Cter-RFP Nter= biobrick+stock glycerol Done
 
-
 
-
[['''-RFP Cter-ClyA Nter-''']]
 
-
 
-
-miss ligation between 2 parts (j'ai fait plusieurs ligation le 7ou8/09, mais pas marché le 9/09 apres culture overnight, voir si les autres ont continué)
 
-
 
-
 
-
[['''PBad-ClyA Cter-RFP Nter-''']]
 
-
 
-
-failed many time with:
 
Pbad cut in S/P and ClyA Cter-RFP Nter in X/P
Pbad cut in S/P and ClyA Cter-RFP Nter in X/P

Revision as of 12:12, 17 October 2009

iGEM > Paris > WetLab > Addressing

WetLab

Main - Addressing - Production - reception -
Addressing


Adressing system

global constructions :


plasmid = PSB3T5


Time required : A lOT !!!!!



Experiments ran :

row 1 row 2 row 3
PCR :

ClyA Cterm matrix : ? Oligo : TM :

ClyA Nterm matrix : ? Oligo : TM :

mRFP Cterm matrix : ? Oligo : TM :

mRFP Nterm plasmid : ? Oligo : TM :


PCR :

-

PCR :

-

Verification on gel :

ok

Verification on gel :

-

Verification on gel :

-

Purification on gel :

ok

Purification on gel :

-

Purification on gel :

-


digestion:

ClyA Cterm S/P

RFP Nterm X/P

PBAD vector : ? E/S


digestion:

ClyA Cter-RFP Nter vector PSB1A3 E/X

digestion:

-

verification digestion:

ok

verification digestion:

ok

verification digestion:

-


ligation:

ClyA Cter-RFP Nter vector PSB1A3

ligation:

PBAD vector : ? E/S ClyA Cter-RFP Nter vector PSB1A3E/X (x2) PBAD vector : ? S/P ClyA Cter-RFP Nter X/P (x2)

ligation:


PCR colo :

ok

PCR colo :

ok

PCR colo :

-


miniprep:

clone :

miniprep:

clone :

miniprep:

-


sequencing :

ok

sequencing :

ok

sequencing :

-

stock glycerol:

ok

stock glycerol

ok

stock glycerol

-



Pbad cut in S/P and ClyA Cter-RFP Nter in X/P

Pbad cut in E/S and ClyA Cter-RFP Nter in E/X


Export system

Production of protein of interest



Production of protein of interest


Time required : A lOT !!!!!



Experiments ran :

row 1 row 2 row 3
PCR :



PCR : PCR :


Verification on gel :

ok

Verification on gel :

ok

Verification on gel :

ok

Purification on gel :

ok

Purification on gel :

ok

Purification on gel :

ok


digestion:



digestion: digestion:
verification digestion:

ok

verification digestion:

ok

verification digestion:

ok


ligation:


ligation: ligation:


PCR colo :

ok

PCR colo :

ok

PCR colo :

ok


miniprep:

clone :

miniprep:

clone :

miniprep:

clone :


sequencing :

ok

sequencing :

ok

sequencing :

ok

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